يُوصى باستخدامه كوسط استنبات أولي لزيادة استخلاص أنواع السالمونيلا المتضررة من الأغذية قبل الاستنبات الانتقائي والعزل. يتوافق تركيب هذا الوسط ومعايير أدائه مع المواصفات الواردة في ISO 6579-1:2017 وISO 21528-1:2004 وISO 22964:2017.
الاستخدام المقصود
يُوصى باستخدامه كوسط استنبات أولي لبكتيريا الأمعاء، مثل السالمونيلا وأنواع الكرونوباكتيريوم، من الأغذية وأعلاف الحيوانات والماء والحليب ومشتقاته وغيرها. يتوافق تركيب هذا الوسط ومعايير أدائه مع المواصفات الواردة في معايير ISO 6579-1:2017، وISO 6887-1:2017، وISO 21528-1:2017، وISO 22964:2017، وISO 19250:2010، وISO 11133:2014، وA1:2018.
تعبير**
ISO 6579-1:2017، ISO 6887-1:2017 (E)، ISO 21528-1:2017، ISO 22964:2017، المواصفات - ماء الببتون المخفف (BPW)
| مكونات |
جم/لتر |
| الهضم الأنزيمي للكازين |
10000 |
| كلوريد الصوديوم |
5000 |
| فوسفات ثنائي الصوديوم الهيدروجيني، دوديكاهيدرات، (Na2HPO4.12H2O) |
9000 |
| فوسفات ثنائي هيدروجين البوتاسيوم (KH2PO4) |
1.500 |
| الرقم الهيدروجيني النهائي (عند 25 درجة مئوية) |
7.0±0.2 |
ماء الببتون المخفف، حبيبي® GM14941
| مكونات |
جم/لتر |
| ببتون# |
10000 |
| كلوريد الصوديوم |
5000 |
| فوسفات ثنائي الصوديوم الهيدروجيني، دوديكاهيدرات، (Na2HPO4.12H2O) |
9000 |
| فوسفات ثنائي هيدروجين البوتاسيوم (KH2PO4) |
1.500 |
| الرقم الهيدروجيني النهائي (عند 25 درجة مئوية) |
7.0±0.2 |
تم تعديل الصيغة وتوحيدها لتناسب معايير الأداء
# يعادل الهضم الأنزيمي للكازين
التعليمات
أذب 20.07 غرام (ما يعادل وزن الوسط المجفف) في 1000 مل من الماء النقي/المقطر. سخّن المحلول إذا لزم الأمر لإذابة الوسط تمامًا. وزّعه حسب الرغبة، ثم عقمه بالتعقيم الحراري في جهاز التعقيم بالبخار عند ضغط 15 رطلًا (121 درجة مئوية) لمدة 15 دقيقة.
المبدأ والتفسير
قد تتعرض الكائنات الدقيقة التي تتعرض لضغوط بيئية لأضرار هيكلية أو أيضية. وتعجز هذه الكائنات عن التكاثر في البيئات الانتقائية. لذا، يجب إنعاش هذه الكائنات المتضررة أو السماح لها بإصلاح الضرر عن طريق حضانتها في بيئة مناسبة غير انتقائية. كما توصي كل من جمعية الصحة العامة الأمريكية (APHA) وإدارة الغذاء والدواء الأمريكية (FDA) باستخدام هذا الوسط للتخصيب الأولي لـ السالمونيلا، الكرونوباكتر و الليستيريا (1،2). لاحظ إيدل وكامبيلماخر (3) أن الإصابة دون المميتة لـ السالمونيلا قد يحدث ذلك في العديد من عمليات حفظ الأغذية. يؤدي التخصيب المسبق في ماء الببتون المخفف (M14941/GM14941) عند درجة حرارة 35 درجة مئوية لمدة 18-24 ساعة إلى إصلاح الخلايا المتضررة (4). يمنع نظام التخفيف تلف البكتيريا الناتج عن تغير درجة حموضة الوسط. كما أوصت لجنة ISO باستخدام وسط التخصيب المسبق هذا للكشف عن الأمعائيات (5)، السالمونيلا (6,7) كرونوباكتر (8) و الليستيريا (9) أنواع من المواد الغذائية والماء وغيرها. كما يُوصى به كمخفف لعدّ جميع الكائنات الحية الدقيقة (10).
نوع العينة
آيزو 6579-1:2017/ آيزو 6887-1:2017/ آيزو 11290-1:2017/ آيزو 21528-1:2017/ آيزو 22964:2017
عينات غذائية تشمل الحليب ومنتجات الألبان، في علف الحيوانات، وفي براز الحيوانات، وفي المياه، وفي عينات بيئية من مرحلة الإنتاج الأولية.
جمع العينات ومعالجتها:
المعالجة: ISO 6887-1:2017 (10) / ISO 11290-1:2017 (9)
عينات التخفيف: تحضير عينات الاختبار، والمعلق الأولي، والتخفيفات العشرية للفحص الميكروبيولوجي
المعالجة: ISO 6579-1:2017 (6)
مرحلة ما قبل الإثراء: يتم إثراء العينات (25 جرامًا في 225 مل) مسبقًا في ماء الببتون المخفف (M14941) ويتم تحضينها عند درجة حرارة 34 درجة مئوية إلى 38 درجة مئوية لمدة 18 ساعة ± ساعتين.
الإثراء الانتقائي: يتم تلقيح 0.1 مل من العينة المخصبة مسبقًا في 10 مل من مرق RVS (M14481) أو أجار MSRV (M1428) ويتم تحضينها عند 41.5 ± 1 درجة مئوية لمدة 24 ± 3 ساعات، ويتم تلقيح 1 مل من المزرعة في مرق MKTTn (M14961) ويتم تحضينها عند 37 ± 1 درجة مئوية لمدة 24 ± 3 ساعات.
عزل: تُزرع المزرعة الناتجة على أجار XLD المعدل (M0311) وتُحضن عند درجة حرارة 37°مئوية لمدة 24 ± 3 ساعات. وفي الوقت نفسه، تُزرع على أجار عزل ثانٍ.
تأكيد: تُجرى الاختبارات البيوكيميائية والمصلية للتأكيد.
المعالجة: ISO 21528-1:2017 (5)
مرحلة ما قبل الإثراء: يتم إثراء العينات (10 غرامات في 90 مل) مسبقًا في ماء الببتون المخفف (M14941) ويتم تحضينها عند 37 ± 1 درجة مئوية لمدة 18 ساعة ± ساعتين.
عزل: ثم يتم زرع المزرعة التي تم الحصول عليها على أجار جلوكوز الصفراء الأحمر البنفسجي (VRBG) (M1684) وحضنها عند 37±1 درجة مئوية لمدة 24±2 ساعة.
تأكيد: تُجرى الاختبارات البيوكيميائية والمصلية للتأكيد.
المعالجة: ISO 22964:2017 (8)
مرحلة ما قبل الإثراء: يتم إثراء العينات (10 غرامات في 90 مل) مسبقًا في ماء الببتون المخفف (M14941) ويتم تحضينها عند درجة حرارة 34 درجة مئوية إلى 38 درجة مئوية لمدة 18 ساعة ± ساعتين.
الإثراء الانتقائي: يتم تلقيح 0.1 مل من العينة المخصبة مسبقًا في 10 مل من مرق كرونوباكتر الانتقائي (M17861) ويتم تحضينها عند 41.5 ± 1 درجة مئوية لمدة 24 ± 2 ساعة.
عزل : ثم يتم زرع المزرعة التي تم الحصول عليها على أجار عزل الكرونوباكتر HiCrome® (CCI Agar) (M2062I) وحضنها عند 41.5 ± 1 درجة مئوية لمدة 24 ± 2 ساعة.
تأكيد: تُجرى الاختبارات البيوكيميائية والمصلية للتأكيد.
المعالجة: ISO 19250:2010(E) (7)
الإثراء المسبق غير الانتقائي: قم بتلقيح 50 مل من BPW (M14941) في درجة حرارة الغرفة بالعينة أو تخفيفاتها، ثم حضّنها عند درجة حرارة (36 ± 2) درجة مئوية لمدة (18 ± 2) ساعة
الإثراء الانتقائي: انقل 0.1 مل من مرق الإثراء الناتج عن المزرعة إلى أنبوب يحتوي على 10 مل من مرق RVS (M1448I) وحضن عند 41.5 ± 1 درجة مئوية لمدة 24 ± 3 ساعات، ثم قم بتلقيح 1 مل من المزرعة في مرق MKTTn (M14961) وحضن عند 36 ± 2 درجة مئوية لمدة 24 ± 3 ساعات.
تأكيد: ثم تُزرع المزرعة الناتجة على وسط XLD Agar المعدل (M031I) وتُحضن عند درجة حرارة 2 مئوية لمدة 24 ± 3 ساعات. وفي الوقت نفسه، تُزرع على وسط عزل ثانٍ.
تأكيد: تُجرى الاختبارات البيوكيميائية والمصلية للتأكيد.
التحذيرات والاحتياطات
اقرأ الملصق قبل فتح العبوة. ارتدِ قفازات/ملابس واقية/واقي للعينين/واقي للوجه. اتبع ممارسات المختبرات الميكروبيولوجية الجيدة عند التعامل مع العينات والمزارع. يجب اتباع الاحتياطات القياسية وفقًا للإرشادات المعتمدة عند التعامل مع العينات. يمكن الرجوع إلى إرشادات السلامة في صحائف بيانات السلامة الفردية.
القيود:
- تختلف الكائنات الحية الفردية في متطلبات نموها وقد تظهر أنماط نمو متغيرة في الوسط.
- تم اختبار كل دفعة من الوسط الغذائي للتأكد من خلوها من الكائنات الحية المحددة في شهادة التحليل. يُنصح المستخدمون بالتحقق من صحة الوسط الغذائي لأي كائن حي دقيق آخر غير المذكور في شهادة التحليل، وذلك بناءً على متطلباتهم الخاصة.
- يجب إجراء المزيد من الاختبارات الفرعية والعزل والاختبارات البيوكيميائية للتأكيد.
ضبط الجودة
مظهر
وسط حبيبي متجانس ذو لون كريمي إلى أصفر.
لون وشفافية الوسط المُحضر
محلول شفاف ذو لون أصفر فاتح بدون أي راسب
رد فعل
تفاعل محلول مائي بتركيز 2.0% وزن/حجم عند درجة حرارة 25 درجة مئوية. الرقم الهيدروجيني: 7.0±0.2
الرقم الهيدروجيني
6.80-7.20
الاستجابة الثقافية
ISO 6887-1:2017
تخفيف: يُستعاد ما يقارب 30% من العدد الأصلي (المستعاد على وسط تريبتون الصويا، M290)، عندما تتراوح مدة حضانة العينة الملقحة بين 45 دقيقة وساعة واحدة عند درجة حرارة 20-25 درجة مئوية. تُحضن الأطباق عند درجة حرارة 37 ± 2 درجة مئوية لمدة 18 ± 2 ساعة.
| الكائن الحي |
اللقاح (وحدة تكوين المستعمرات) |
استعادة |
| الإشريكية القولونية ATCC 8739 (00012*) |
50-100 |
±30% من العدد الأصلي |
| الإشريكية القولونية ATCC 25922 (00013*) |
50-100 |
±30% من العدد الأصلي |
| المكورات العنقودية الذهبية ATCC 6538 (00032*) |
50-100 |
±30% من العدد الأصلي |
| المكورات العنقودية الذهبية ATCC 25923 (00034*) |
50-100 |
±30% من العدد الأصلي |
ISO 6887-1:2017
تخفيف: استعادة ± 30% من العدد الأصلي (المستعاد على وسط تريبتون الصويا أجار، M290)، عندما تكون مدة حفظ العينة الملقحة ساعة واحدة ± 5 دقائق عند درجة حرارة 20 ± 2 درجة مئوية. يتم تحضين الأطباق عند درجة حرارة 37 ± 2 درجة مئوية لمدة 18 ساعة ± ساعتين.
استعادة
| الكائن الحي |
اللقاح (وحدة تكوين المستعمرات) |
استعادة |
| الليستيريا المستوحدة ATCC 13932 (00021*) |
50-100 |
±30% من العدد الأصلي |
| الليستيريا المستوحدة ATCC 35152 (00109*) |
50-100 |
±30% من العدد الأصلي |
آيزو 6579-1:2017 وآيزو 21528-1:2017
إنتاجية
الخصائص الثقافية التي لوحظت بعد فترة حضانة عند درجة حرارة تتراوح بين 34 درجة مئوية و 38 درجة مئوية لمدة 18 ساعة ± ساعتين.
| الكائن الحي |
اللقاح (وحدة تكوين المستعمرات) |
نمو |
| السالمونيلا المعوية ATCC 13076 (00030*) |
50-100 |
جيد-مُزدهر |
| السالمونيلا التيفيموريوم ATCC 14028 (00031*) |
50-100 |
جيد-مُزدهر |
| الإشريكية القولونية ATCC 8739 (00012*) |
50-100 |
جيد-مُزدهر |
| الإشريكية القولونية ATCC 25922 (00013*) |
50-100 |
جيد-مُزدهر |
ISO 22964:2017
إنتاجية
الخصائص الثقافية التي لوحظت بعد فترة حضانة عند درجة حرارة تتراوح بين 34 درجة مئوية و 38 درجة مئوية لمدة 18 ساعة ± ساعتين.
| الكائن الحي |
اللقاح (وحدة تكوين المستعمرات) |
نمو |
| كرونوباكتر ساكازاكي ATCC 29544 (00214*) |
50-100 |
جيد-مُزدهر |
| Cronobacter muytjensii ATCC 51329 (00213*) |
50-100 |
جيد-مُزدهر |
ISO 19250:2010 (E)
إنتاجية
الخصائص الثقافية التي لوحظت بعد فترة حضانة عند درجة حرارة 36± 2 درجة مئوية لمدة 24± 3 ساعات
| الكائن الحي |
اللقاح (وحدة تكوين المستعمرات) |
نمو |
| السالمونيلا التيفيموريوم ATCC 14028 (00031*) |
50-100 |
جيد-مُزدهر |
المفتاح: * أرقام WDCM المقابلة
التخزين وفترة الصلاحية
يُحفظ في درجة حرارة تتراوح بين 10 و30 درجة مئوية في عبوة محكمة الإغلاق، ويُحفظ الوسط المُحضّر في درجة حرارة تتراوح بين 20 و30 درجة مئوية. يُستخدم قبل تاريخ انتهاء الصلاحية المذكور على الملصق. عند الفتح، يجب تخزين المنتج في مكان جاف بعد إحكام غلق الزجاجة لمنع تكوّن التكتلات نتيجة امتصاص المنتج للرطوبة. قد يؤدي التخزين غير السليم للمنتج إلى تكوّن التكتلات. يُحفظ في مكان جاف جيد التهوية بعيدًا عن درجات الحرارة القصوى ومصادر الاشتعال. يُغلق الوعاء بإحكام بعد الاستخدام. يُنصح باستخدام المنتج خلال فترة الصلاحية المحددة للحصول على أفضل النتائج.
تصرف
يجب على المستخدم ضمان التخلص الآمن من مستحضرات هذا المنتج المستخدمة أو غير الصالحة للاستخدام عن طريق التعقيم بالبخار و/أو الحرق. يجب اتباع إجراءات المختبر المعتمدة في التخلص من المواد المعدية، ويجب تطهير المواد التي تلامس العينة والتخلص منها وفقًا لتقنيات المختبر الحالية (12، 13).
صحيفة بيانات السلامة (SDS)
