يوصى به لتحديد العصيات المعوية سالبة الجرام على أساس تخمير الدكستروز واللاكتوز والسكروز وإنتاج كبريتيد الهيدروجين.
الاستخدام المقصود
يوصى به لتحديد العصيات المعوية سالبة الجرام على أساس تخمير الدكستروز واللاكتوز والسكروز وإنتاج كبريتيد الهيدروجين.
تعبير
| مكونات |
جم/لتر |
| ببتون |
10000 |
| التريبتون |
10000 |
| مستخلص الخميرة |
3.000 |
| ببتون إتش إم بي# |
3.000 |
| اللاكتوز |
10000 |
| السكروز |
10000 |
| دكستروز (جلوكوز) |
1.000 |
| كلوريد الصوديوم |
5000 |
| كبريتات الحديدوز |
0.200 |
| ثيوسلفات الصوديوم |
0.300 |
| فينول أحمر |
0.024 |
| أجار |
12000 |
الرقم الهيدروجيني النهائي (عند 25 درجة مئوية): 7.4±0.2
تم تعديل الصيغة وتوحيدها لتناسب معايير الأداء
# يعادل مستخلص لحم البقر
التعليمات
أذب 64.52 غرامًا في 1000 مل من الماء المقطر/المنقى. سخّن المزيج حتى الغليان لإذابة الوسط تمامًا. امزج جيدًا ووزّعه في أنابيب اختبار. عقم الأنابيب بالتعقيم الحراري (الأوتوكلاف) عند ضغط 15 رطلًا (121 درجة مئوية) لمدة 15 دقيقة. اترك الوسط ليتصلب على شكل مائل مع ترك قاعدة بطول بوصة واحدة تقريبًا.
المبدأ والتفسير
اقترح سولكين وويلت (1) في الأصل وسط أجار الحديد الثلاثي السكري، ثم عدّله هاجنا (2) لتحديد البكتيريا المعوية. يتوافق هذا الوسط مع توصيات جمعية الصحة العامة الأمريكية (APHA) لفحص اللحوم والمنتجات الغذائية (3)، وفحص الحليب ومنتجات الألبان (4)، واختبار الحد الميكروبي لتأكيد وجود السالمونيلا (5، 6)، وتحديد العصيات سالبة الغرام (5، 7).
يتوافق هذا الوسط مع توصية APHA، لفحص اللحوم والمنتجات الغذائية (3)، ولفحص الحليب ومنتجات الألبان (4)، ولاختبار الحد الميكروبي لتأكيد وجود السالمونيلا (5،6) وفي تحديد العصيات سالبة الجرام (5،7).
يُوفّر التريبتون والبيبتون ومستخلص الخميرة وبيبتون HM B مركبات نيتروجينية وكبريت وعناصر نادرة وفيتامينات ب المركبة، وغيرها. ويحافظ كلوريد الصوديوم على التوازن الأسموزي. اللاكتوز والسكروز والدكستروز هي الكربوهيدرات القابلة للتخمر. ويُشكّل ثيوكبريتات الصوديوم وأيونات الحديدوز نظام مؤشر H2S. أما الفينول الأحمر فهو مؤشر الرقم الهيدروجيني. تُنتج الكائنات الحية التي تُخمّر الجلوكوز مجموعة متنوعة من الأحماض، مما يُغيّر لون الوسط من الأحمر إلى الأصفر. وتتحرر كمية أكبر من الأحماض في الجزء السفلي (التخمر) مقارنةً بالجزء العلوي (التنفس). كما تُنتج البكتيريا النامية منتجات قلوية من خلال نزع الكربوكسيل التأكسدي للبيبتون، وتُعادل هذه المنتجات القلوية الكميات الكبيرة من الأحماض الموجودة في الجزء السفلي. وبالتالي، فإن ظهور ميل قلوي (أحمر) وقاعدة حمضية (صفراء) بعد الحضانة يشير إلى أن الكائن الحي قادر على تخمير الجلوكوز ولكنه غير قادر على تخمير اللاكتوز و/أو السكروز. البكتيريا التي تخمر اللاكتوز أو السكروز (أو كليهما)، بالإضافة إلى الجلوكوز، تنتج كميات كبيرة من الحمض، مما يمنع عودة الرقم الهيدروجيني إلى وضعه الطبيعي في تلك المنطقة، وبالتالي تظهر البكتيريا ميلاً وقاعدة حمضية. يُكشف عن إنتاج الغاز (ثاني أكسيد الكربون) من خلال وجود تشققات أو فقاعات في الوسط، عندما يتسرب الغاز المتراكم. يتم اختزال الثيوسلفات إلى كبريتيد الهيدروجين بواسطة عدة أنواع من البكتيريا، ويتحد كبريتيد الهيدروجين مع أيونات الحديديك في أملاح الحديديك لإنتاج راسب أسود غير قابل للذوبان من كبريتيد الحديدوز. لا يحدث اختزال الثيوسلفات إلا في بيئة حمضية، وعادةً ما يحدث اسوداد في قاعدة الأنبوب. ينبغي استخدام أجار الحديد الثلاثي السكري بالتوازي مع أجار اليوريا/المرق (M112/M111) للتمييز بين السالمونيلا و بروتيوس الأنواع. يمكن تلخيص التفاعلات على النحو التالي:
- منحدر قلوي / قاعدة حمضية فقط تخمير الجلوكوز
- مائل حمضي / قاعدة حمضية - تخمير الجلوكوز والسكروز أو تخمير الجلوكوز واللاكتوز أو تخمير السكريات الثلاثة جميعها، الجلوكوز واللاكتوز والسكروز.
- وجود فقاعات أو تشققات - إنتاج الغاز
- وجود راسب أسود - إنتاج غاز كبريتيد الهيدروجين
نوع العينة
عزل بكتيري نقي من الماء أو الطعام أو عينة سريرية.
جمع العينات ومعالجتها:
بالنسبة للعينات السريرية، اتبع التقنيات المناسبة للتعامل مع العينات وفقًا للإرشادات المعمول بها (8،9).
بالنسبة لعينات الطعام والألبان، اتبع التقنيات المناسبة لجمع العينات ومعالجتها وفقًا للإرشادات (3، 4). أما بالنسبة لعينات المياه، فاتبع التقنيات المناسبة لجمع العينات ومعالجتها وفقًا للإرشادات والمعايير المحلية (5). بعد الاستخدام، يجب تعقيم المواد الملوثة بالتعقيم الحراري قبل التخلص منها.
التحذيرات والاحتياطات
للاستخدام التشخيصي في المختبر. للاستخدام المهني فقط. اقرأ الملصق قبل فتح العبوة. ارتدِ قفازات/ملابس واقية/واقي للعينين/واقي للوجه. اتبع ممارسات المختبرات الميكروبيولوجية الجيدة عند التعامل مع العينات والمزارع. يجب اتباع الاحتياطات القياسية وفقًا للإرشادات المعتمدة عند التعامل مع العينات السريرية. يمكن الرجوع إلى إرشادات السلامة في صحائف بيانات السلامة الفردية.
القيود:
- بعض أعضاء الأمعائيات وإنتاج كبريتيد الهيدروجين السالمونيلا قد لا تُظهر بعض البكتيريا إنتاجًا لغاز كبريتيد الهيدروجين (H2S) على وسط TSI Agar. وقد تُظهر بعض البكتيريا إنتاجًا لغاز كبريتيد الهيدروجين على وسط Kligler Iron Agar، ولكن ليس على وسط TSI Agar. ويُعزى ذلك إلى أن استهلاك السكروز في وسط TSI Agar يُثبط المسار الإنزيمي المسؤول عن إنتاج غاز كبريتيد الهيدروجين.
الأداء والتقييم
من المتوقع أن يكون أداء الوسط فعالاً عند استخدامه وفقًا للإرشادات الموجودة على الملصق خلال فترة الصلاحية عند تخزينه في درجة الحرارة الموصى بها.
ضبط الجودة
مظهر
مسحوق متجانس سهل التدفق، لونه أصفر فاتح إلى وردي
التجلط
متماسك، مماثل لهلام الأجار بنسبة 1.2%.
لون وشفافية الوسط المُحضر
يتشكل في الأنابيب على شكل أنابيب مائلة هلام شفاف ذو لون أحمر مائل للوردي إلى لون لؤلؤي قليلاً.
رد فعل
تفاعل محلول مائي بتركيز 6.45% وزن/حجم عند درجة حرارة 25 درجة مئوية. الرقم الهيدروجيني: 7.4±0.2
الرقم الهيدروجيني
7.20-7.60
الاستجابة الثقافية
الخصائص الثقافية التي لوحظت بعد فترة حضانة عند درجة حرارة 35-37 درجة مئوية لمدة 18-24 ساعة.
مفتاح:
- (*) أرقام WDCM المقابلة.
- (#) كان يُعرف سابقًا باسم Enterobacter aerogenes
- ($) كان يُعرف سابقًا باسم بروتيوس فولغاريس
التخزين وفترة الصلاحية
يُحفظ في درجة حرارة تتراوح بين 10 و30 درجة مئوية في وعاء مُحكم الإغلاق، ويُحفظ الوسط المُحضّر في درجة حرارة تتراوح بين 2 و8 درجات مئوية. يُستخدم قبل تاريخ انتهاء الصلاحية المذكور على الملصق. عند الفتح، يجب تخزين المنتج في مكان جاف بعد إحكام غلق الزجاجة لمنع تكوّن التكتلات نتيجة امتصاص المنتج للرطوبة. قد يؤدي التخزين غير السليم للمنتج إلى تكوّن التكتلات. يُحفظ في مكان جاف جيد التهوية بعيدًا عن درجات الحرارة القصوى ومصادر الاشتعال. يُغلق الوعاء بإحكام بعد الاستخدام.
يكون أداء المنتج في أفضل حالاته عند استخدامه خلال فترة الصلاحية المحددة.
تصرف
يجب على المستخدم ضمان التخلص الآمن من مستحضرات هذا المنتج المستخدمة أو غير الصالحة للاستخدام عن طريق التعقيم بالبخار و/أو الحرق. يجب اتباع إجراءات المختبر المعتمدة في التخلص من المواد المعدية، ويجب تطهير المواد التي تلامس العينة السريرية والتخلص منها وفقًا لتقنيات المختبر الحالية (8، 9).
مرجع
- Sulkin ES and Willett JC, 1940, J. Lab. Clin. Med., 25:649.
- حاجنا أ.أ، 1945، ج. باكتيريول، 49:516.
- سالفينجر واي، وتورتوريلو إم إل، 2015، موسوعة طرق الفحص الميكروبيولوجي للأغذية، الطبعة الخامسة، الجمعية الأمريكية للصحة العامة، واشنطن العاصمة
- وير إتش إم وفرانك جيه إتش، 2004، الطرق القياسية للفحص الميكروبيولوجي لمنتجات الألبان، الطبعة السابعة عشرة، جمعية الصحة العامة الأمريكية، واشنطن العاصمة
- ليبس دبليو سي، براون-هاولاند إي بي، باكستر تي إي، محررون. الطرق القياسية لفحص المياه ومياه الصرف الصحي، الطبعة الرابعة والعشرون. واشنطن العاصمة: مطبعة APHA؛ 2023.
- Finegold SM and Baron EJ, 1986, Bailey and Scotts Diagnostic Microbiology, 7th Ed., The CV Mosby Co., St. Louis.
- ماكفادين ج.، 1985، أوساط لعزل وزراعة وتحديد وصيانة البكتيريا الطبية، المجلد 1، ويليامز وويلكنز، بالتيمور.
- إيزنبرغ، إتش دي. دليل إجراءات علم الأحياء الدقيقة السريرية. الطبعة الثانية.
- يورجنسن، جيه إتش، بفالر، إم إيه، كارول، كيه سي، فونك، جي، لاندري، إم إل، ريختر، إس إس ووارنوك، دي دبليو (2015) دليل علم الأحياء الدقيقة السريري، الطبعة الحادية عشرة. المجلد 1.
صحيفة بيانات السلامة (SDS)
