Zur selektiven Isolierung und Zählung von coliformen Organismen in Wasser mittels Membranfilterverfahren gemäß den in ISO 9308-1:1990 festgelegten Spezifikationen.
Bestimmungsgemäße Verwendung
Empfohlen als Voranreicherungsmedium zur Steigerung der Genesung verletzter Tiere Salmonellen Arten aus Lebensmitteln vor selektiver Anreicherung und Isolierung sowie aus Proben.
Zusammensetzung
| Zutaten |
g / L |
| Proteose-Pepton |
10.000 |
| Natriumchlorid |
5.000 |
| Dinatriumhydrogenphosphat |
3.500 |
| Kaliumhydrogenphosphat |
1.500 |
Endgültiger pH-Wert (bei 25 °C): 7,2 ± 0,2
Die Formel wurde angepasst und standardisiert, um den Leistungsparametern gerecht zu werden.
Wegbeschreibung
20,0 g in 1000 ml gereinigtem/destilliertem Wasser suspendieren. Bei Bedarf erwärmen, um das Medium vollständig aufzulösen. In 50-ml-Portionen in Röhrchen oder Kolben abfüllen oder nach Bedarf. Durch Autoklavieren bei 15 psi (121 °C) für 15 Minuten sterilisieren. Falls gewünscht, aseptisch den rehydrierten Inhalt einer Ampulle CCV-Supplement (FD247) zu 1000 ml Medium zur Anreicherung geben. Escherichia coli O157:H7.
Prinzip und Auslegung
Gepuffertes Peptonwasser ist ein Voranreicherungsmedium, das die Regeneration von subletal geschädigten Zellen unterstützen soll. Salmonellen vor der Überführung in ein Selektivmedium. Dieses Voranreicherungsmedium ist frei von Inhibitoren, gut gepuffert und bietet Bedingungen für die Regeneration von Zellen, die durch Lebensmittelkonservierungsprozesse geschädigt wurden. Edel und Kampelmacher (1) stellten fest, dass subletale Schädigungen von Salmonellen Dies kann durch Konservierungsmethoden wie Hitze, Trocknung, hohen osmotischen Druck, Konservierungsmittel oder pH-Wert-Änderungen verursacht werden. Gepuffertes Peptonwasser während der Voranreicherungsphase unterstützt die Regeneration geschädigter Zellen, die empfindlich auf niedrigen pH-Wert reagieren können (2). Dies ist besonders wichtig für pflanzliche Proben, die eine geringe Pufferkapazität aufweisen. Dieses Medium kann zur Prüfung von Trockenfutter für Geflügel verwendet werden (3). In einer Studie zur Isolierung von Salmonellen Bei Fleischproben, die künstlich mit subletal geschädigten Organismen kontaminiert wurden, zeigte die Voranreicherung in gepuffertem Peptonwasser bei 37 °C über 18 Stunden vor der Selektion in Tetrathionat-Brillantgrün-Galle-Bouillon (M1255) im Vergleich zur direkten Selektionsmethode überlegene Ergebnisse. Laktosebouillon wird häufig als Voranreicherungsmedium verwendet, kann aber die Ausbeute beeinträchtigen. Salmonellen (4).
Das Nährmedium enthält Proteosepepton als Quelle für Kohlenstoff, Stickstoff, Vitamine und Mineralstoffe. Natriumchlorid sorgt für den osmotischen Ausgleich, und Phosphate puffern das Medium. Die Nährlösung ist nährstoffreich und ermöglicht eine hohe Regenerationsrate subletal geschädigter Bakterien sowie ein intensives Wachstum. Das Phosphatpuffersystem schützt die Bakterien vor Schäden durch pH-Wert-Schwankungen im Medium.
Beimpfen Sie 10 g der Probe in 50 ml dieses Mediums und inkubieren Sie diese 18 Stunden lang bei 35–37 °C. Überführen Sie 10 ml dieses Mediums in 100 ml Tetrathionat-Bouillon (M032) und inkubieren Sie diese 24–48 Stunden lang bei 43 °C. Anschließend erfolgt eine Subkultivierung auf selektiven Nährmedien. Untersuchen Sie die Platten auf charakteristische Merkmale. Salmonellen Kolonien.
Art der Probe
Lebensmittel- und Milchproben
Probenentnahme und -behandlung
Bei Lebensmittel- und Milchproben sind die in den Richtlinien (5, 6, 7) beschriebenen geeigneten Verfahren zur Probenahme und -verarbeitung anzuwenden. Kontaminierte Materialien müssen nach Gebrauch durch Autoklavieren sterilisiert werden, bevor sie entsorgt werden.
Warnung und Vorsichtsmaßnahmen
- Lesen Sie vor dem Öffnen des Behälters das Etikett. Tragen Sie Schutzhandschuhe/Schutzkleidung/Augenschutz/Gesichtsschutz. Beachten Sie beim Umgang mit Proben und Kulturen die üblichen mikrobiologischen Laborpraktiken. Standardvorkehrungen gemäß den geltenden Richtlinien/relevanten Sicherheitsdatenblättern.
- Jede Charge des Nährmediums wurde auf die im Analysezertifikat (COA) aufgeführten Organismen getestet. Anwendern wird empfohlen, das Medium je nach ihren individuellen Anforderungen auch auf andere als die im COA genannten Mikroorganismen zu validieren.
- Zur Bestätigung müssen weitere Anreicherungs- und Isolierungsmaßnahmen durchgeführt werden.
Leistung und Bewertung
Die Leistungsfähigkeit des Mediums ist zu erwarten, wenn es gemäß den Anweisungen auf dem Etikett innerhalb des Verfallsdatums verwendet und bei der empfohlenen Temperatur gelagert wird.
Qualitätskontrolle
Aussehen: Cremefarbenes bis gelbes, homogenes, rieselfähiges Medium.
Farbe und Klarheit des vorbereiteten Mediums: Hellgelbe, klare Lösung ohne Niederschlag
Reaktion: Reaktion einer 2,0 % (w/v) wässrigen Lösung bei 25 °C. pH-Wert: 7,2 ± 0,2
pH-Wert: 7.00-7.40
Kulturelle Reaktion
Kulturelle Merkmale nach einer Inkubation bei 35-37°C für 18-24 Stunden. (Die Anzucht erfolgt auf XLD-Agar (M031).)
| Organismus |
Inokulum (KBE) |
Wachstum |
Erholung |
|
Salmonella Enteritidis ATCC 13076 (00030*) |
50-100 |
gut-üppig |
>=50% |
|
Salmonella Typhi ATCC 6539 |
50-100 |
gut-üppig |
>=50% |
|
Salmonella Typhimurium ATCC 14028 (00031*) |
50-100 |
gut-üppig |
>=50% |
|
Escherichia coli O157:H7 NCTC 12900 (00014*) |
50-100 |
gut-luxuriant [Erholung auf Trypton-Soja-Agar (M290)] |
>=50% |
Legende: *Zugehörige WDCM-Nummern.
Lagerung und Haltbarkeit
Lagern Sie das Produkt in einem dicht verschlossenen Behälter bei 10–30 °C und das zubereitete Medium bei 15–30 °C. Verwenden Sie das Produkt vor dem auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum. Nach dem Öffnen sollte das Produkt trocken und gut verschlossen aufbewahrt werden, um Klumpenbildung aufgrund der hygroskopischen Eigenschaften des Produkts zu vermeiden. Unsachgemäße Lagerung kann zu Klumpenbildung führen. Lagern Sie das Produkt an einem trockenen, gut belüfteten Ort, geschützt vor extremen Temperaturen und Zündquellen. Verschließen Sie den Behälter nach Gebrauch wieder fest. Die beste Produktleistung wird erzielt, wenn das Produkt innerhalb des angegebenen Verfallsdatums verwendet wird.
Entsorgung
Der Anwender muss die sichere Entsorgung gebrauchter oder unbrauchbarer Zubereitungen dieses Produkts durch Autoklavieren und/oder Verbrennen gewährleisten. Bei der Entsorgung infektiöser Materialien sind die etablierten Laborverfahren einzuhalten. Material, das mit der Probe in Kontakt gekommen ist, muss dekontaminiert und gemäß den geltenden Labortechniken entsorgt werden (8,9).
Referenzen
- Edel und Kampelmacher, 1973, Bull. WHO, 48:167.
- Sadovski, 1977, J. Food Technol., 12:85.
- Juven, Cox, Bailey, Thomson, Charles und Schutze, 1984, J. Food Prot., 47:299.
- Angelotti, 1963, Academic Press, New York, NY
- Amerikanische Vereinigung für öffentliche Gesundheit, Standardmethoden zur Untersuchung von Milchprodukten, 1978, 14. Auflage, Washington DC
- Salfinger Y. und Tortorello ML (Hrsg.), 2015, Kompendium der Methoden zur mikrobiologischen Untersuchung von Lebensmitteln, 5. Auflage, American Public Health Association, Washington, DC
- Wehr HM und Frank JH, 2004, Standardmethoden für die mikrobiologische Untersuchung von Milchprodukten, 17. Auflage, APHA Inc., Washington, DC
- Isenberg, HD Handbuch der klinischen mikrobiologischen Verfahren. 2. Auflage.
- Jorgensen, JH, Pfaller, MA, Carroll, KC, Funke, G., Landry, ML, Richter, SS und Warnock, DW (2015) Handbuch der klinischen Mikrobiologie, 11. Auflage. Band 1.
Sicherheitsdatenblatt (SDB)
