Bestimmungsgemäße Verwendung
Empfohlen zur Isolierung, Zählung und vorläufigen Identifizierung der Bakterienflora in den Harnwegen.
Zusammensetzung
| Zutaten |
g/L |
| Pepton |
4.000 |
| Trypton |
4.000 |
| HM Pepton B # |
3.000 |
| Laktose |
10.000 |
| L-Cystin |
0,128 |
| Agar |
15.000 |
Endgültiger pH-Wert (bei 25 °C): 7,3±0,2
**Formel angepasst, standardisiert, um Leistungsparameter zu erfüllen #- Entspricht Rindfleischextrakt
Wegbeschreibung
36,1 g in 998 ml gereinigtem/destilliertem Wasser suspendieren. Den rehydrierten Inhalt einer Ampulle Bromthymolblau-Supplement (FD091) zugeben. Unter Rühren erhitzen, bis sich das Medium vollständig aufgelöst hat. 15 Minuten bei 121 °C (15 psi) autoklavieren. Gut mischen und in sterile Petrischalen füllen.
Prinzip und Auslegung
Auf einem festen Untergrund berichtete Sandy von einem Schwärmen von Proteus Arten könnten durch Einschränkung der Elektrolyte kontrolliert werden (1). Früheres Schwärmen von Proteus Die Kontrolle erfolgte durch Zugabe von Alkohol, Tensiden, Natriumazid, Borsäure etc. zum Medium (1). Später wurde Sandys Medium von Mackey und Sandy (2) modifiziert, indem Mannitol durch Lactose und Saccharose ersetzt und die Konzentration von Agar und Bromthymolblau erhöht wurde. Diese Formulierung wurde von denselben Autoren weiter modifiziert und als CLED (Cystin-Lactose-Elektrolyt-Mangel) bezeichnet, indem die Saccharose entfernt und L-Cystin zur Förderung des Wachstums cystinabhängiger Zwergcoliformen hinzugefügt wurde (3). Dieses Medium wird für die Anwendung in der Urinbakteriologie empfohlen, da es das Wachstum aller Harnwegspathogene fördert. CLED-Medium wird auch für Teststreifenverfahren und als Transportmedium für das Inokulum von Urinproben empfohlen (2, 3, 4).
Pepton, HM-Pepton B und Trypton liefern Stickstoff und Kohlenstoff, langkettige Aminosäuren, Vitamine und weitere essentielle Wachstumsnährstoffe. Laktose ist der fermentierbare Zucker. L-Cystin fördert das Wachstum von Zwergcoliformen. Bromthymolblau dient als pH-Indikator und färbt sich bei saurem pH-Wert gelb.
Die Bakteriurie kann quantifiziert werden, indem die Oberfläche eines Agar-Nährmediums mit geeigneter Verdünnung beimpft wird. Das Medium sollte unmittelbar nach der Urinsammlung beimpft werden. Alternativ kann die Beimpfung auch mit einer kalibrierten Impföse oder mittels Doppelverdünnungs-Ausgussverfahren erfolgen (5,6). Shigella Die Arten können auf diesem Nährmedium möglicherweise nicht wachsen. Der Beginn einer Antibiotikatherapie vor der Probenentnahme, ein niedriger pH-Wert des Urins (unter 5) usw. können zu einer niedrigen Bakterienzahl bei infizierten Patienten führen.
Art der Probe
Klinisch: Urin
Probenentnahme und -behandlung
Bei klinischen Proben sind die entsprechenden Techniken zur Probenhandhabung gemäß den etablierten Richtlinien (7,8) zu befolgen. Kontaminierte Materialien müssen nach Gebrauch durch Autoklavieren sterilisiert und anschließend entsorgt werden.
Warnung und Vorsichtsmaßnahmen
Nur zur In-vitro-Diagnostik. Nur für den professionellen Gebrauch. Lesen Sie vor dem Öffnen des Behälters das Etikett. Tragen Sie Schutzhandschuhe/Schutzkleidung/Augenschutz/Gesichtsschutz. Beachten Sie beim Umgang mit Proben und Kulturen die üblichen mikrobiologischen Laborpraktiken. Beim Umgang mit klinischen Proben sind die Standardvorkehrungen gemäß den geltenden Richtlinien zu treffen. Sicherheitshinweise finden Sie in den jeweiligen Sicherheitsdatenblättern.
Einschränkungen
- Dieses Medium wird bei Harnwegsinfektionen empfohlen. Eine niedrige Keimzahl im Urin kann eine Folge der Antibiotikatherapie oder eines niedrigen pH-Werts im Urin sein.
- Die Genesung hängt von der Urinkonzentration ab.
- Das Nährmedium sollte unmittelbar nach der Urinsammlung beimpft werden.
-
Shigella Die Arten können auf diesem Nährboden möglicherweise nicht wachsen.
- Um bessere Ergebnisse zu erzielen, sollte das Medium nicht länger als 24 Stunden inkubiert werden, da sich bei einer Überzahl von Laktosefermentierern das gesamte Medium gelb färben und so das Vorhandensein von Nicht-Laktosefermentierern maskieren kann.
Leistung und Bewertung
Die Leistungsfähigkeit des Mediums ist zu erwarten, wenn es gemäß den Anweisungen auf dem Etikett innerhalb des Verfallsdatums verwendet und bei der empfohlenen Temperatur gelagert wird.
Qualitätskontrolle
Aussehen Cremefarbenes bis gelbes, homogenes, rieselfähiges Pulver.
Gelierung Fest, vergleichbar mit 1,5%igem Agar-Gel.
Farbe und Klarheit des zubereiteten Mediums Bei Zugabe von Bromthymolblau-Zusatz (FD091): Es bildet sich ein grünes, klares bis leicht opaleszentes Gel in Petrischalen.
Reaktion Reaktion einer 3,61 % (w/v) wässrigen Lösung bei 25 °C. pH-Wert: 7,3 ± 0,2
pH 7.10-7.50
Kulturelle Reaktion Kulturelle Merkmale, die nach Zugabe von Bromthymolblau-Supplement (FD091) und einer Inkubation bei 35-37°C für 18-24 Stunden beobachtet wurden.
| Organismus |
Inokulum (KBE) |
Wachstum |
Erholung |
Farbe der Kolonie |
|
Escherichia coli ATCC 25922 (00013*) |
50-100 |
gut-üppig |
>=70% |
gelb, undurchsichtig, Mitte etwas dunkler gelb |
|
Enterococcus faecalis ATCC 29212 (00087*) |
50-100 |
gut-üppig |
>=70% |
leicht gelblich oder grünlich |
|
Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 (00097*) |
50-100 |
gut-üppig |
>=70% |
gelb bis weißlich blau |
|
Proteus vulgaris ATCC 13315 |
50-100 |
gut-üppig |
>=70% |
Blau |
|
Staphylococcus aureus subsp. aureus ATCC 25923 (00034*) |
50-100 |
gut-üppig |
>=70% |
tiefgelb |
|
Salmonella Typhi ATCC 6539 |
50-100 |
gut-üppig |
>=70% |
bläulich |
Lagerung und Haltbarkeit
Lagern Sie das Produkt in einem dicht verschlossenen Behälter bei 10–30 °C und das zubereitete Medium bei 2–8 °C. Verwenden Sie es vor dem auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum. Nach dem Öffnen sollte das Produkt trocken und gut verschlossen aufbewahrt werden, um Klumpenbildung aufgrund der hygroskopischen Eigenschaften des Produkts zu vermeiden. Unsachgemäße Lagerung kann zu Klumpenbildung führen. Lagern Sie das Produkt an einem trockenen, gut belüfteten Ort, geschützt vor extremen Temperaturen und Zündquellen. Verschließen Sie den Behälter nach Gebrauch wieder fest. Die beste Produktleistung wird erzielt, wenn das Produkt innerhalb des angegebenen Verfallsdatums verwendet wird.
Entsorgung
Der Anwender muss die sichere Entsorgung gebrauchter oder unbrauchbarer Zubereitungen dieses Produkts durch Autoklavieren und/oder Verbrennen gewährleisten. Bei der Entsorgung infektiöser Materialien sind die etablierten Laborverfahren einzuhalten. Material, das mit klinischen Proben in Kontakt gekommen ist, muss dekontaminiert und gemäß den geltenden Labortechniken entsorgt werden (7,8).
Referenz
- Sandys, 1960, J. Med. Lab. Technol., 17:224.
- Mackey und Sandys, 1965, Br. Med. J., 2:1286.
- Mackey und Sandys, 1966, Br. Med. J., 1:1173.
- Dixson JMS und Clark MA, 1968, Conc. Med. Assoc. J., 99 (15)
- Benner EJ, 1970, Appl. Microbiol., 19(3), 409
- MacFaddin JF, 1985, Medien zur Isolierung, Kultivierung, Identifizierung und Erhaltung medizinischer Bakterien, Band I, Williams and Wilkins, Baltimore
- Isenberg, HD Handbuch der klinischen mikrobiologischen Verfahren. 2. Auflage.
- Jorgensen, JH, Pfaller, MA, Carroll, KC, Funke, G., Landry, ML, Richter, SS und Warnock, DW (2015) Handbuch der klinischen Mikrobiologie, 11. Auflage. Band 1.
Sicherheitsdatenblatt (SDB)
