Zur Differenzierung von Darmbakterien, insbesondere von Salmonella Arizonae, anhand ihrer Fähigkeit, Lysin zu decarboxylieren oder zu desaminieren und Schwefelwasserstoff (H2S) zu bilden.
Bestimmungsgemäße Verwendung
Empfohlen zur Differenzierung von Darmbakterien, insbesondere Salmonella Arizonae Die Zusammensetzung dieses Mediums entspricht den Richtlinien der FDA (BAM) und der APHA (APHA). Es basiert auf der Fähigkeit der Bakterien, Lysin zu decarboxylieren oder zu desaminieren und Schwefelwasserstoff ( H₂S ) zu bilden.
Zusammensetzung**
| Zutaten |
Gramm / Liter |
| Pepton |
5.000 |
| Hefeextrakt |
3.000 |
| Dextrose (Glucose) |
1.000 |
| L-Lysin |
10.000 |
| Eisen(III)-ammoniumcitrat |
0,500 |
| Natriumthiosulfat |
0,040 |
| Bromkresolpurpur |
0,020 |
| Agar |
15.000 |
Endgültiger pH-Wert (bei 25 °C): 6,7 ± 0,2
Die Formel wurde an die Leistungsparameter angepasst und standardisiert.
Wegbeschreibung
34,56 g in 1000 ml gereinigtem/destilliertem Wasser suspendieren. Zum vollständigen Auflösen des Mediums erhitzen. In Röhrchen abfüllen und 15 Minuten bei 15 psi (121 °C) autoklavieren. Die Röhrchen schräg abkühlen lassen, sodass sie tiefe Böden bilden.
Prinzip und Auslegung
Lysin-Eisen-Agar wurde von Edwards und Fife (1) zur Erkennung von Laktosefermentation entwickelt. Salmonellen . Salmonellen Es ist bekannt, dass sie Lysin schnell decarboxylieren und große Mengen an Schwefelwasserstoff produzieren (2,3). Dieses Medium ist ein empfindliches Medium zum Nachweis von laktosefermentierenden und laktosenichtfermentierenden Zellen. Salmonellen Arten. Viele Stämme dieser Gruppe fermentieren Laktose sehr schnell und unterdrücken dadurch die H₂S -Produktion auf Dreifachzucker-Eisen-Agar (M021). Daher besteht die Möglichkeit, dass die häufig bei Lebensmittelvergiftungen vorkommenden Organismen übersehen werden. Thatcher und Clark beschrieben die Isolierung von Salmonellen Arten aus Lebensmitteln von selektivem Agar und beimpfen Sie diese gemeinsam auf Lysin-Eisen-Agar und Dreifachzucker-Eisen (M021). Mit diesen beiden Medien lässt sich eine bessere Unterscheidung zwischen coliformen Organismen wie z. B. Escherichia coli Und Shigella Arten (4,5). Dieses Medium wird von FDA BAM (6) und APHA (7) für biochemische Tests empfohlen. Salmonellen aus Lebensmittelproben.
Pepton und Hefeextrakt liefern essentielle Nährstoffe. Dextrose ist eine Quelle fermentierbarer Kohlenhydrate. Eisen(III)-ammoniumcitrat und Natriumthiosulfat sind Indikatoren für die Bildung von Schwefelwasserstoff ( H₂S ). Kulturen, die Schwefelwasserstoff produzieren, verursachen eine Schwarzfärbung des Mediums durch die Bildung von Eisen(II)-sulfid. Die Lysin-Decarboxylierung führt zu einer alkalischen Reaktion (violette Färbung) und liefert das Amin Cadaverin. Organismen, die Lysin nicht decarboxylieren, bilden einen Säureboden (gelbe Färbung). Organismen, die Lysin desaminieren, bilden α-Ketocarbonsäure, die unter Sauerstoffeinfluss mit Eisensalzen nahe der Mediumoberfläche zu einer rotbraunen Verbindung reagiert. Das Medium wird bis zum Boden des Säurebodens eingestochen und auf Schrägagar ausgestrichen.
Art der Probe
Isolierte Mikroorganismen
Probenentnahme und -behandlung
Bei Lebensmittel- und Milchproben sind die in den Richtlinien (6,7) beschriebenen geeigneten Verfahren zur Probenahme und -verarbeitung anzuwenden. Kontaminierte Materialien müssen nach Gebrauch durch Autoklavieren sterilisiert werden, bevor sie entsorgt werden.
Warnung und Vorsichtsmaßnahmen
Lesen Sie vor dem Öffnen des Behälters das Etikett. Tragen Sie Schutzhandschuhe/Schutzkleidung/Augenschutz/Gesichtsschutz. Beachten Sie beim Umgang mit Proben und Kulturen die üblichen mikrobiologischen Laborpraktiken. Standardvorkehrungen gemäß den geltenden Richtlinien sind beim Umgang mit Proben zu treffen. Sicherheitshinweise finden Sie in den jeweiligen Sicherheitsdatenblättern.
Einschränkungen
- Einzelne Organismen unterscheiden sich in ihren Wachstumsbedingungen und können auf dem Nährmedium unterschiedliche Wachstumsmuster aufweisen.
- Jede Charge des Nährmediums wurde auf die im Analysezertifikat (COA) aufgeführten Organismen getestet. Anwendern wird empfohlen, das Medium je nach ihren individuellen Anforderungen auch auf andere als die im COA genannten Mikroorganismen zu validieren.
Leistung und Bewertung
Die Leistungsfähigkeit des Mediums ist zu erwarten, wenn es gemäß den Anweisungen auf dem Etikett innerhalb des Verfallsdatums verwendet und bei der empfohlenen Temperatur gelagert wird.
Qualitätskontrolle
Aussehen Hellgelbes bis gräulich-gelbes, homogenes, rieselfähiges Pulver
Gelierung Fest, vergleichbar mit 1,5%igem Agar-Gel
Farbe und Klarheit des zubereiteten Mediums Violett gefärbtes, klares bis leicht trübes Gel bildet sich in Röhrchen als Schrägform.
Reaktion Reaktion einer 3,45 % (w/v) wässrigen Lösung bei 25 °C. pH-Wert: 6,7 ± 0,2
pH 6,50-6,90
Kulturelle Reaktion Kulturelle Merkmale, die nach einer Inkubation bei 35-37°C über 18-24 Stunden beobachtet wurden.
Legende: *Zugehörige WDCM-Nummern.
Lagerung und Haltbarkeit
Lagern Sie das Produkt in einem dicht verschlossenen Behälter bei 10–30 °C und das zubereitete Medium bei 2–8 °C. Verwenden Sie das Produkt vor dem auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum. Nach dem Öffnen sollte das Produkt trocken und gut verschlossen aufbewahrt werden, um Klumpenbildung aufgrund der hygroskopischen Eigenschaften des Produkts zu vermeiden. Unsachgemäße Lagerung kann zu Klumpenbildung führen. Lagern Sie das Produkt an einem trockenen, gut belüfteten Ort, geschützt vor extremen Temperaturen und Zündquellen. Verschließen Sie den Behälter nach Gebrauch wieder fest. Die beste Produktleistung wird erzielt, wenn das Produkt innerhalb des angegebenen Verfallsdatums verwendet wird.
Entsorgung
Der Anwender muss die sichere Entsorgung gebrauchter oder unbrauchbarer Zubereitungen dieses Produkts durch Autoklavieren und/oder Verbrennen gewährleisten. Bei der Entsorgung infektiöser Materialien sind die etablierten Laborverfahren einzuhalten. Material, das mit klinischen Proben in Kontakt gekommen ist, muss dekontaminiert und gemäß den geltenden Labortechniken entsorgt werden (8,9).
Referenz
- Edward PR und Fife MA, 1961, Appl. Microbiol., 9:47
- Ewing WH, Davis BR und Edward PR, 1960, Pub. Hlth. Labs., 18:7
- Moeller V., 1954, Acta Pathol. Microbiol. Scand., 355:25
- Finegold SM und Martin WJ, 1982, Bailey and Scotts Diagnostic Microbiology, 6. Auflage, The CV Mosby Co., St. Louis.
- Johnson JG, Kunz LJ, Barron W. und Ewing WH, 1966, Appl. Microbiol., 14:21
- Salfinger Y. und Tortorello ML, 2015, Kompendium der Methoden zur mikrobiologischen Untersuchung von Lebensmitteln, 5. Auflage, American Public Health Association, Washington, DC
- Peter Feng, Stephen D. Weagant, Michael A. Grant, William Burkhard, FDA BAM Kapitel 4: Aufzählung von Escherichia coli und die coliformen Bakterien
- Isenberg, HD Handbuch der klinischen mikrobiologischen Verfahren, 2. Auflage.
- Jorgensen, JH, Pfaller, MA, Carroll, KC, Funke, G., Landry, ML, Richter, SS und Warnock, DW (2015) Handbuch der klinischen Mikrobiologie, 11. Auflage. Band 1.
Sicherheitsdatenblatt (SDB)
