Zur Isolierung und Identifizierung von enteropathogenen Escherichia coli-Stämmen, die mit Durchfallerkrankungen bei Säuglingen in Zusammenhang stehen.
Bestimmungsgemäße Verwendung
Empfohlen zur Isolierung und Identifizierung enteropathogener Erreger Escherichia coli Stämme, die mit Durchfallerkrankungen bei Säuglingen in Verbindung gebracht werden.
Zusammensetzung**
| Zutaten |
g / L |
| Pepton |
17.000 |
| Proteose-Pepton |
3.000 |
| D-Sorbitol |
10.000 |
| Gallensalzmischung |
1.500 |
| Natriumchlorid |
5.000 |
| Neutralrot |
0,030 |
| Kristallviolett |
0,001 |
| Agar |
13.500 |
Endgültiger pH-Wert (bei 25 °C): 7,1±0,2
Die Formel wurde an die Leistungsparameter angepasst und standardisiert.
Wegbeschreibung
50,03 g in 1000 ml gereinigtem/destilliertem Wasser suspendieren. Zum vollständigen Auflösen erhitzen. Anschließend 15 Minuten bei 15 psi (121 °C) im Autoklaven sterilisieren. ÜBERHITZUNG VERMEIDEN. Auf 45-50 °C abkühlen lassen. Gut vermischen und in sterile Petrischalen gießen.
Prinzip und Auslegung
MacConkey-Sorbit-Agar basiert auf der von Rappaport und Henigh (1) beschriebenen Zusammensetzung. Dieses Medium wird zur Isolierung enteropathogener Bakterien empfohlen. Escherichia coli O157: H7 fermentiert Laktose, aber nicht Sorbit, und bildet daher farblose Kolonien. Dieser Organismus ist als Ursache hämorrhagischer Kolitis bekannt (2). E. coli O157: H7 ist ein humanpathogenes Bakterium, das mit hämorrhagischer Kolitis in Verbindung gebracht wird und auf die Wirkung eines Shiga-ähnlichen Toxins (SLT) zurückzuführen ist (3,4).
Auf Standard-MacConkey-Agar mit Laktose ist dieser Stamm von anderen laktosefermentierenden Bakterien nicht zu unterscheiden. E. coli . In MacConkey-Sorbit-Agar wird Laktose durch Sorbit ersetzt. Im Gegensatz zu den meisten E. coli Stämme, E. coli O157:H7 fermentiert Sorbitol langsam oder gar nicht (5,6). Das Wachstum von E. coli O157:H7 bildet auf MacConkey-Agar mit Sorbit farblose Kolonien, während die meisten Darmbakterien Sorbit fermentieren und rosa erscheinen. MacConkey-Agar mit Sorbit ermöglicht daher die einfache Erkennung von E. coli O157:H7 (3,4,7).
Pepton und Proteosepepton liefern notwendige Nährstoffe wie stickstoff- und kohlenstoffhaltige Verbindungen, langkettige Aminosäuren, Mineralstoffe, Vitamine und Spurenelemente für das Wachstum von Organismen. Kristallviolett und eine Gallensalzmischung im Medium hemmen das Wachstum grampositiver Bakterien. Natriumchlorid sorgt für das osmotische Gleichgewicht. Neutralrot dient als Indikator. D-Sorbit ist das fermentierbare Kohlenhydrat.
Art der Probe
Klinische Proben – Stuhl-, Lebensmittel- und Milchproben.
Probenentnahme und -behandlung
Bei klinischen Proben sind die entsprechenden Verfahren zur Probenhandhabung gemäß den geltenden Richtlinien (5, 8) zu befolgen. Bei Lebensmittel- und Milchproben sind die entsprechenden Verfahren zur Probenentnahme und -verarbeitung gemäß den Richtlinien (9, 10, 11) zu befolgen. Kontaminierte Materialien müssen nach Gebrauch durch Autoklavieren sterilisiert und anschließend entsorgt werden.
Warnung und Vorsichtsmaßnahmen
Zur In-vitro-Diagnostik. Nur für den professionellen Gebrauch. Vor dem Öffnen des Behälters das Etikett lesen. Schutzhandschuhe/Schutzkleidung/Augenschutz/Gesichtsschutz tragen. Bei der Handhabung von Proben und Kulturen die üblichen mikrobiologischen Laborpraktiken beachten. Beim Umgang mit klinischen Proben sind die Standardvorkehrungen gemäß den geltenden Richtlinien zu treffen. Sicherheitshinweise finden Sie in den jeweiligen Sicherheitsdatenblättern.
Einschränkungen
- MacConkey-Sorbit-Agar sollte jedoch nicht ausschließlich zum Nachweis pathogener Bakterien verwendet werden. E. coli O157: H7-Stämme, da einige nicht-toxische Stämme Sorbit ebenfalls nicht fermentieren (4).
- Zur weiteren Bestätigung müssen weitere biochemische Tests durchgeführt werden.
Leistung und Bewertung
Die Leistungsfähigkeit des Mediums ist zu erwarten, wenn es gemäß den Anweisungen auf dem Etikett innerhalb des Verfallsdatums verwendet und bei der empfohlenen Temperatur gelagert wird.
Qualitätskontrolle
Aussehen: Hellgelbes bis rosa homogenes rieselfähiges Pulver
Gelierung: Fest, vergleichbar mit 1,35%igem Agar-Gel.
Farbe und Klarheit des vorbereiteten Mediums: In Petrischalen bildet sich ein purpurrotes, klares bis leicht trübes Gel.
Reaktion: Reaktion einer 5,0 % (w/v) wässrigen Lösung bei 25 °C. pH-Wert: 7,1 ± 0,2
pH-Wert: 6,90-7,30
Kulturelle Reaktion
Kulturelle Merkmale, die nach einer Inkubation bei 35-37°C über 18-24 Stunden beobachtet wurden.
Legende: *Zugehörige WDCM-Nummern.
Lagerung und Haltbarkeit
Lagern Sie das Produkt in einem dicht verschlossenen Behälter bei 10–30 °C und das zubereitete Medium bei 20–30 °C. Verwenden Sie es vor dem auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum. Nach dem Öffnen sollte das Produkt trocken und luftdicht gelagert werden. Verschließen Sie die Flasche fest, um Klumpenbildung aufgrund der hygroskopischen Eigenschaften des Produkts zu vermeiden. Unsachgemäße Lagerung kann zu Klumpenbildung führen. Lagern Sie das Produkt an einem trockenen, gut belüfteten Ort, geschützt vor extremen Temperaturen und Zündquellen. Verschließen Sie den Behälter nach Gebrauch wieder fest. Die beste Produktleistung wird erzielt, wenn das Produkt innerhalb des angegebenen Verfallsdatums verwendet wird.
Entsorgung
Der Anwender muss die sichere Entsorgung gebrauchter oder unbrauchbarer Zubereitungen dieses Produkts durch Autoklavieren und/oder Verbrennen gewährleisten. Bei der Entsorgung infektiöser Materialien sind die etablierten Laborverfahren einzuhalten. Material, das mit klinischen Proben in Kontakt gekommen ist, muss dekontaminiert und gemäß den geltenden Labortechniken entsorgt werden (5,8).
Referenz
- Rappaport F. und Henigh E., 1952, J. Clin. Pathol., 6 : 361.
- Karmali MA, Petric M., Lim C. et al., 1985, J. Infect. Dis.,151:775.
- Zentrum für Krankheitskontrolle, 1991, Morbid. Mortal, Weekly Rep 40:265.
- March SB und Ratnam S., 1986, J. Clin. Microbiol., 23:869.
- Isenberg, HD Handbuch der klinischen mikrobiologischen Verfahren. 2. Auflage.
- Pelczar MJ, Chan EC und Kreig MR, 1986, Mikrobiologie, 5. Auflage, McGraw Hill Book Co., New York.
- Murray PR, Baron JH, Pfaller MA, Tenover FC und Yolken RH (Hrsg.), 1999, Handbuch der klinischen Mikrobiologie, 7. Auflage. American Society for Microbiology, Washington, DC
- Jorgensen, JH, Pfaller, MA, Carroll, KC, Funke, G., Landry, ML, Richter, SS und Warnock, DW (2015) Handbuch der klinischen Mikrobiologie, 11. Auflage. Band 1.
- Amerikanische Vereinigung für öffentliche Gesundheit, Standardmethoden zur Untersuchung von Milchprodukten, 1978, 14. Auflage, Washington DC
- Salfinger Y. und Tortorello ML (Hrsg.), 2015, Kompendium der Methoden zur mikrobiologischen Untersuchung von Lebensmitteln, 5. Auflage, American Public Health Association, Washington, DC
- Wehr HM und Frank JH, 2004, Standardmethoden für die mikrobiologische Untersuchung von Milchprodukten, 17. Auflage, APHA Inc., Washington, DC
Sicherheitsdatenblatt (SDB)
