Zur Bestimmung der Schwefelwasserstoffproduktion, der Indolbildung und der Motilität von Darmbakterien aus klinischen und nicht-klinischen Proben.
Verwendungszweck
Empfohlen zur Bestimmung der Schwefelwasserstoffproduktion, der Indolbildung und der Motilität von Darmbakterien aus klinischen und nicht-klinischen Proben.
Zusammensetzung**
| Zutaten |
Gramm / Liter |
| HM Pepton B# |
3.000 |
| Pepton |
30.000 |
| Peptonisiertes Eisen |
0,200 |
| Natriumthiosulfat |
0,025 |
| Agar |
3.000 |
Endgültiger pH-Wert (bei 25 °C): 7,3±0,2
Die Formel wurde an die Leistungsparameter angepasst und standardisiert.
# - Entspricht Rindfleischextrakt
Wegbeschreibung
36,23 g in 1000 ml gereinigtem/destilliertem Wasser suspendieren. Zum vollständigen Auflösen des Mediums erhitzen. In Röhrchen abfüllen. 15 Minuten bei 15 psi (121 °C) autoklavieren. Die Röhrchen aufrecht abkühlen lassen.
Prinzip und Auslegung
Das SIM-Medium wird zur Differenzierung von Darmbakterien verwendet, insbesondere Salmonellen Und Shigella auf der Grundlage der Sulfidproduktion, der Indolbildung und der Motilität (1,5). Jordan und Victorson (3) berichteten, dass Salmonellen Paratyphi A und Paratyphi B lassen sich anhand der H₂S -Produktion mit Bleiacetat unterscheiden. Sulkin und Willett (7) verwendeten Dreifachzucker-Eisen-Agar mit 1 % Agar zur Bestimmung der Motilität sowie der H₂S -Produktion und der Kohlenhydratfermentation. Sosa (6) beschrieb ein Peptonmedium mit niedrigem Agargehalt zur Bestimmung der Motilität und des Indolgehalts.
Das SIM-Medium ermöglicht die Bestimmung von drei Merkmalen, anhand derer sich Enterobakterien differenzieren lassen. Peptonisiertes Eisen und Natriumthiosulfat dienen als Indikatoren für die H₂S -Produktion. Dieses H₂S reagiert mit peptonisiertem Eisen zu einem schwarzen Niederschlag von Eisen(II)-sulfid (6,7). Bewegliche Organismen verstärken die H₂S -Reaktion. Sie wachsen diffus von der Inokulationslinie weg, während unbewegliche Organismen entlang der Einstichlinie wachsen. Die halbfeste Konsistenz des Mediums ermöglicht den Nachweis der Beweglichkeit. Ausstrahlendes Wachstum von der zentralen Einstichlinie deutet auf bewegliche Testorganismen hin. Pepton und HM-Pepton B liefern stickstoff- und kohlenstoffhaltige Verbindungen, langkettige Aminosäuren, Vitamine und weitere essentielle Nährstoffe. Tryptophan aus dem Pepton wird von spezifischen Bakterien zu Indol abgebaut (1). Das Indol wird durch Zugabe chemischer Reagenzien nach der Inkubationszeit nachgewiesen.
Frische Kulturen werden mit einem einzigen Stich einer geraden Nadel durch die Mitte des Mediums beimpft. Nach der Inkubation wird die Motilität (diffuses Wachstum von der Einstichstelle nach außen oder Trübung des Mediums) und die H₂S -Produktion (Schwarzfärbung des Mediums) beobachtet. Zum Nachweis der Indolbildung werden drei bis vier Tropfen Kovacs-Reagenz (1) hinzugegeben und die Entwicklung einer Rotfärbung (positive Reaktion) beobachtet. Motilität und H₂S -Produktion werden vor der Bestimmung der Indolbildung ermittelt.
Art der Probe
Isolierte Mikroorganismen
Probenentnahme und -behandlung
Kontaminierte Materialien müssen nach Gebrauch durch Autoklavieren sterilisiert werden, bevor sie entsorgt werden können.
Warnung und Vorsichtsmaßnahmen
Lesen Sie vor dem Öffnen des Behälters das Etikett. Tragen Sie Schutzhandschuhe/Schutzkleidung/Augenschutz/Gesichtsschutz. Beachten Sie beim Umgang mit Proben und Kulturen die üblichen mikrobiologischen Laborpraktiken. Standardvorkehrungen gemäß den geltenden Richtlinien sind beim Umgang mit Proben zu treffen. Sicherheitshinweise finden Sie in den jeweiligen Sicherheitsdatenblättern.
Einschränkungen
- Dieses Medium ist ein Universalmedium und unterstützt möglicherweise nicht das Wachstum anspruchsvoller Organismen.
Leistung und Bewertung
Die Leistungsfähigkeit des Mediums ist zu erwarten, wenn es gemäß den Anweisungen auf dem Etikett innerhalb des Verfallsdatums verwendet und bei der empfohlenen Temperatur gelagert wird.
Qualitätskontrolle
Aussehen Cremefarbenes bis beigefarbenes, homogenes, rieselfähiges Pulver
Gelierung Halbfest, vergleichbar mit 0,3%igem Agar-Gel.
Farbe und Klarheit des zubereiteten Mediums Mittelbernsteinfarbenes, leicht trübes Gel bildet sich in Röhren als Boden.
Reaktion Reaktion einer 3,6 % (w/v) wässrigen Lösung bei 25 °C. pH-Wert: 7,3 ± 0,2
pH 7.10-7.50
Kulturelle Reaktion Kulturelle Merkmale, die nach einer Inkubation bei 35-37°C über 18-24 Stunden beobachtet wurden.
| Organismus |
Inokulum (KBE) |
Wachstum |
Motilität |
Indolproduktion (nach Zugabe von Kovacs) |
H 2 S |
|
Escherichia coli ATCC 25922 (00013*) |
50-100 |
üppig |
positiv, Wachstum weg von der Stabilisierungslinie, was zu Trübung führt |
positive Reaktion, roter Ring an der Grenzfläche des Mediums |
negative Reaktion |
|
Salmonellen Typhimurium ATCC 14028 (00031*) |
50-100 |
üppig |
positiv, Wachstum weg von der Stabilisierungslinie, was zu Trübung führt |
negative Reaktion |
positive Reaktion, Schwärzung des Mediums |
|
Shigella flexneri ATCC 12022 (00126*) |
50-100 |
üppig |
negativ, Wachstum entlang der Stabilisierungslinie, umgebendes Medium bleibt klar |
negative Reaktion |
negative Reaktion |
|
Salmonellen Paratyphi A ATCC 9150 |
50-100 |
üppig |
positiv, Wachstum weg von der Stabilisierungslinie, was zu Trübung führt |
negative Reaktion |
Negative Reaktion |
|
Salmonellen Paratyphi B ATCC 8739 |
50-100 |
üppig |
positiv, Wachstum weg von der Stabilisierungslinie, was zu Trübung führt |
Negative Reaktion |
Positive Reaktion, Schwärzung des Mediums |
|
Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 (00097*) |
50-100 |
üppig |
negativ, Wachstum entlang der Stabilisierungslinie, umgebendes Medium bleibt klar |
Negative Reaktion |
Negative Reaktion |
Legende: *Zugehörige WDCM-Nummern.
Lagerung und Haltbarkeit
Lagern Sie das Produkt in einem dicht verschlossenen Behälter bei 10–30 °C und das zubereitete Medium bei 2–8 °C. Verwenden Sie das Produkt vor dem auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum. Nach dem Öffnen sollte das Produkt trocken und gut verschlossen aufbewahrt werden, um Klumpenbildung aufgrund der hygroskopischen Eigenschaften des Produkts zu vermeiden. Unsachgemäße Lagerung kann zu Klumpenbildung führen. Lagern Sie das Produkt an einem trockenen, gut belüfteten Ort, geschützt vor extremen Temperaturen und Zündquellen. Verschließen Sie den Behälter nach Gebrauch fest. Verwenden Sie das Produkt vor dem auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum.
Die beste Produktleistung wird bei Verwendung innerhalb des angegebenen Verfallsdatums erzielt.
Entsorgung
Der Anwender muss die sichere Entsorgung gebrauchter oder unbrauchbarer Zubereitungen dieses Produkts durch Autoklavieren und/oder Verbrennen gewährleisten. Bei der Entsorgung infektiöser Materialien sind die etablierten Laborverfahren einzuhalten. Material, das mit klinischen Proben in Kontakt gekommen ist, muss dekontaminiert und gemäß den geltenden Labortechniken entsorgt werden (2,4).
Referenz
- Ewing WH, 1986, Edwards and Ewings Identification of Enterobacteriaceae, 4. Auflage, Elsevier Science Publishing Co., Inc. New York.
- Isenberg, HD Handbuch der klinischen mikrobiologischen Verfahren. 2. Auflage.
- Jordan EO und Victorson R., 1917, J. Inf. Dis., 21:554.
- Jorgensen, JH, Pfaller, MA, Carroll, KC, Funke, G., Landry, ML, Richter, SS und Warnock, DW (2015) Handbuch der klinischen Mikrobiologie, 11. Auflage. Band 1.
- MacFaddin JF, 1985, Medien zur Isolierung, Kultivierung, Identifizierung und Erhaltung medizinischer Bakterien, Band 1, Williams and Wilkins, Baltimore.
- Sosa L., 1943, Rev. Inst. Bacteriol., 11:286.
- Sulkin SE und Willett JC, 1940, J. Lab. Clin. Med., 25:649.
Sicherheitsdatenblatt (SDB)
