Empfohlen zur Identifizierung gramnegativer Enterobakterien anhand der Fermentation von Dextrose, Laktose und Saccharose sowie der Bildung von Schwefelwasserstoff.
Bestimmungsgemäße Verwendung
Empfohlen zur Identifizierung gramnegativer Enterobakterien anhand der Fermentation von Dextrose, Laktose und Saccharose sowie der Bildung von Schwefelwasserstoff.
Zusammensetzung
| Zutaten |
g/L |
| Pepton |
10.000 |
| Trypton |
10.000 |
| Hefeextrakt |
3.000 |
| HM Pepton B# |
3.000 |
| Laktose |
10.000 |
| Saccharose |
10.000 |
| Dextrose (Glucose) |
1.000 |
| Natriumchlorid |
5.000 |
| Eisen(II)-sulfat |
0,200 |
| Natriumthiosulfat |
0,300 |
| Phenolrot |
0,024 |
| Agar |
12.000 |
Endgültiger pH-Wert (bei 25 °C): 7,4 ± 0,2
Die Formel wurde an die Leistungsparameter angepasst und standardisiert.
# Entspricht Rindfleischextrakt
Wegbeschreibung
64,52 g des Mediums in 1000 ml gereinigtem/destilliertem Wasser suspendieren. Zum Sieden erhitzen, bis sich das Medium vollständig gelöst hat. Gut mischen und in Reagenzgläser füllen. 15 Minuten bei 15 psi (121 °C) im Autoklaven sterilisieren. Das Medium sollte eine schräge Form mit einem etwa 2,5 cm langen Rand bilden.
Prinzip und Auslegung
Dreifachzucker-Eisen-Agar wurde ursprünglich von Sulkin und Willett (1) vorgeschlagen und von Hajna (2) zur Identifizierung von Enterobacteriaceae modifiziert. Dieses Medium entspricht den Empfehlungen der APHA für die Untersuchung von Fleisch und Lebensmitteln (3), für die Untersuchung von Milch und Milchprodukten (4) sowie für mikrobiologische Grenzwerttests zum Nachweis von Salmonellen (5,6) und zur Identifizierung gramnegativer Stäbchenbakterien (5,7).
Dieses Medium entspricht den Empfehlungen der APHA für die Untersuchung von Fleisch und Lebensmitteln (3), für die Untersuchung von Milch und Milchprodukten (4) sowie für mikrobiologische Grenzwerttests zum Nachweis von Salmonellen (5,6) und zur Identifizierung gramnegativer Stäbchenbakterien (5,7).
Trypton, Pepton, Hefeextrakt und HM-Pepton B liefern Stickstoffverbindungen, Schwefel, Spurenelemente und Vitamin-B-Komplex. Natriumchlorid sorgt für das osmotische Gleichgewicht. Laktose, Saccharose und Dextrose sind die fermentierbaren Kohlenhydrate. Natriumthiosulfat und Eisen(II)-Ionen bilden das H₂S-Indikatorsystem. Phenolrot dient als pH-Indikator. Organismen, die Glucose fermentieren, produzieren verschiedene Säuren, wodurch sich die Farbe des Mediums von Rot nach Gelb verändert. Im Bodensubstrat (Fermentation) werden mehr Säuren freigesetzt als im Schrägagar (Atmung). Wachsende Bakterien bilden zudem alkalische Produkte durch die oxidative Decarboxylierung von Pepton. Diese alkalischen Produkte neutralisieren die großen Mengen an Säure im Bodensubstrat. Das Auftreten eines alkalischen (roten) Schrägagars und eines sauren (gelben) Bodensubstrats nach der Inkubation deutet somit darauf hin, dass der Organismus Glucose fermentiert, aber weder Laktose noch Saccharose fermentieren kann. Bakterien, die neben Glucose auch Lactose oder Saccharose (oder beides) fermentieren, produzieren große Mengen Säure. Dies verhindert eine pH-Wert-Rückbildung in diesem Bereich, wodurch die Bakterien eine saure Schräglage und einen sauren Boden aufweisen. Die Gasbildung (CO₂) wird durch Risse oder Blasen im Medium nachgewiesen, wenn das angesammelte Gas entweicht. Thiosulfat wird von verschiedenen Bakterienarten zu Schwefelwasserstoff reduziert. H₂S verbindet sich mit Eisen(III)-Ionen von Eisen(III)-Salzen zu einem unlöslichen schwarzen Niederschlag von Eisen(II)-sulfid. Die Reduktion von Thiosulfat erfolgt nur in saurem Milieu, und die Schwarzfärbung tritt üblicherweise im Boden des Röhrchens auf. Dreifachzucker-Eisen-Agar sollte parallel zu Harnstoff-Agar/Bouillon (M112/M111) verwendet werden, um zwischen verschiedenen Bakterienarten zu unterscheiden. Salmonellen Und Proteus Arten. Die Reaktionen lassen sich wie folgt zusammenfassen:
- Alkalisch schräg / nur im sauren Boden fermentiert (Glucose)
- Säure-Schräg- / Säure-Butt-Glucose- und Saccharose-fermentiert oder Glucose und Lactose-fermentiert oder alle drei Zucker, Glucose, Lactose und Saccharose, fermentiert.
- Blasen oder Risse vorhanden - Gasproduktion
- Schwarzer Niederschlag vorhanden - H₂S-Gasproduktion
Art der Probe
Reines Bakterienisolat aus Wasser, Lebensmitteln oder klinischen Proben.
Probenentnahme und -behandlung:
Bei klinischen Proben sind die für den Umgang mit Proben geeigneten Techniken gemäß den etablierten Richtlinien (8,9) zu befolgen.
Bei Lebensmittel- und Milchproben sind die in den Richtlinien (3,4) beschriebenen Verfahren zur Probenahme und -verarbeitung anzuwenden. Bei Wasserproben sind die in den Richtlinien und lokalen Normen (5) beschriebenen Verfahren zur Probenahme und -verarbeitung anzuwenden. Kontaminierte Materialien müssen nach Gebrauch vor der Entsorgung autoklaviert werden.
Warnung und Vorsichtsmaßnahmen
Zur In-vitro-Diagnostik. Nur für den professionellen Gebrauch. Lesen Sie vor dem Öffnen des Behälters das Etikett. Tragen Sie Schutzhandschuhe/Schutzkleidung/Augenschutz/Gesichtsschutz. Beachten Sie beim Umgang mit Proben und Kulturen die üblichen mikrobiologischen Laborpraktiken. Beim Umgang mit klinischen Proben sind die Standardvorkehrungen gemäß den geltenden Richtlinien zu treffen. Sicherheitshinweise finden Sie in den jeweiligen Sicherheitsdatenblättern.
Einschränkungen:
- Einige Mitglieder der Enterobacteriaceae und H2S produzieren Salmonellen Bakterien können auf TSI-Agar H₂S-frei sein. Einige Bakterien produzieren H₂S auf Kligler-Eisenagar, jedoch nicht auf TSI-Agar. Dies kann daran liegen, dass die Verwertung von Saccharose im TSI-Agar den enzymatischen Stoffwechselweg hemmt, der zur H₂S-Produktion führt.
Leistung und Bewertung
Die Leistungsfähigkeit des Mediums ist zu erwarten, wenn es gemäß den Anweisungen auf dem Etikett innerhalb des Verfallsdatums verwendet und bei der empfohlenen Temperatur gelagert wird.
Qualitätskontrolle
Aussehen
Hellgelbes bis rosa homogenes rieselfähiges Pulver
Gelierung
Fest, vergleichbar mit 1,2%igem Agar-Gel.
Farbe und Klarheit des zubereiteten Mediums
In den Röhrchen bildet sich ein rosarot gefärbtes, klares bis leicht trübes Gel in schräger Form.
Reaktion
Reaktion einer 6,45 % (w/v) wässrigen Lösung bei 25 °C. pH-Wert: 7,4 ± 0,2
pH
7,20-7,60
Kulturelle Reaktion
Kulturelle Merkmale, die nach einer Inkubation bei 35-37°C über 18-24 Stunden beobachtet wurden.
Schlüssel:
- (*) Entsprechende WDCM-Nummern.
- (#) Früher bekannt als Enterobacter aerogenes
- ($) Früher bekannt als Proteus vulgaris
Lagerung und Haltbarkeit
Lagern Sie das Produkt in einem dicht verschlossenen Behälter bei 10–30 °C und das zubereitete Medium bei 2–8 °C. Verwenden Sie das Produkt vor dem auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum. Nach dem Öffnen muss das Produkt trocken und hygroskopisch gelagert werden. Verschließen Sie die Flasche fest, um Klumpenbildung zu vermeiden. Unsachgemäße Lagerung kann zu Klumpenbildung führen. Lagern Sie das Produkt an einem trockenen, gut belüfteten Ort, geschützt vor extremen Temperaturen und Zündquellen. Verschließen Sie den Behälter nach Gebrauch wieder fest.
Die beste Produktleistung wird bei Verwendung innerhalb des angegebenen Verfallsdatums erzielt.
Entsorgung
Der Anwender muss die sichere Entsorgung gebrauchter oder unbrauchbarer Zubereitungen dieses Produkts durch Autoklavieren und/oder Verbrennen gewährleisten. Bei der Entsorgung infektiöser Materialien sind die etablierten Laborverfahren einzuhalten. Material, das mit klinischen Proben in Kontakt gekommen ist, muss dekontaminiert und gemäß den geltenden Labortechniken entsorgt werden (8,9).
Referenz
- Sulkin ES und Willett JC, 1940, J. Lab. Clin. Med., 25:649.
- Hajna AA, 1945, J. Bacteriol, 49:516.
- Salfinger Y. und Tortorello ML, 2015, Kompendium der Methoden zur mikrobiologischen Untersuchung von Lebensmitteln, 5. Auflage, American Public Health Association, Washington, DC
- Wehr HM und Frank JH, 2004, Standardmethoden für die mikrobiologische Untersuchung von Milchprodukten, 17. Auflage, APHA Inc., Washington, DC
- Lipps WC, Braun-Howland EB, Baxter TE, Hrsg. Standardmethoden zur Untersuchung von Wasser und Abwasser, 24. Aufl. Washington DC: APHA Press; 2023.
- Finegold SM und Baron EJ, 1986, Bailey and Scotts Diagnostic Microbiology, 7. Auflage, The CV Mosby Co., St. Louis.
- MacFaddin J., 1985, Medien zur Isolierung, Kultivierung, Identifizierung und Erhaltung medizinischer Bakterien, Band 1, Williams and Wilkins, Baltimore.
- Isenberg, HD Handbuch der klinischen mikrobiologischen Verfahren. 2. Auflage.
- Jorgensen, JH, Pfaller, MA, Carroll, KC, Funke, G., Landry, ML, Richter, SS und Warnock, DW (2015) Handbuch der klinischen Mikrobiologie, 11. Auflage. Band 1.
Sicherheitsdatenblatt (SDB)
